Procesamiento de Muestras Celulares en Citologías por Ilerna

Procesamiento de Muestras Celulares

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En los laboratorios de anatomía patológica no solo se procesan muestras procedentes de biopsias. Las citologías, técnicas menos invasivas, son también muy utilizadas y representan un método de diagnóstico y seguimiento de diferentes patologías de gran relevancia.

En las citologías, a diferencia de las biopsias, se estudian células aisladas que proceden tanto de superficies epiteliales como de regiones u órganos internos y que han sido extraídas mediante diferentes técnicas clínicas. Y el técnico de anatomía patológica deberá conocer los diferentes tipos de procesamiento de estas muestras para garantizar unos resultados óptimos.

Materiales, Reactivos y Equipos Básicos para el Procesamiento Citológico

Materiales para Procesamiento Citológico

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Cubetas de tinción:

Las cubetas de tinción son recipientes rectangulares, de distintas capacidades y materiales. Tienen una tapadera_que evita la evaporación de los colorantes, ya que la mayoría contienen alcohol entre sus componentes.

Algunas cubetas tienen ranuras en el interior para colocar los portaobjetos y otras disponen de unas "cestas" que cargan con los portaobjetos y se sumergen en ellas.

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Sistemas de filtros de membranas:

Se utilizan para filtrar la muestra, aclarar y eliminar partículas, líquidos y gases. También permiten, gracias a su morfología, retener células de un tamaño superior al diámetro de poro elegido, por lo que se utilizan frecuentemente en citología, y especialmente en técnicas de HPLC.

La HPLC o cromatografia liquida de alta resolución es un tipo de cromatografia en la que la fase móvil se hace pasar a través de una columna que contiene la fase estacionaria.

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Micropipetas:

Las micropipetas son pipetas automáticas de gran precisión y suponen un instrumento básico en el laboratorio, imprescindible para tomar y dispensar volúmenes muy pequeños, del orden de los microlitros y de manera muy precisa.

1 0.1 - 20 ul 0.5 - 20 ul 1.0 - 50 ul 2.0 - 200 l 5.0 - 300 pl 50 - 1000 pl 0.5 - 5 ml 1.0 - 10 ml

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Pipetas:

La pipeta es un tubo largo y más o menos estrecho que termina en un estrechamiento. Está graduada, por lo que sirve para medir volúmenes de manera muy precisa (excepto en el caso de las pipetas Pasteur que son similares a un cuentagotas). Pueden ser de vidrio o de plástico, siendo estas últimas desechables.

Para esterilizar las pipetas de vidrio y poder volver a utilizarlas (así como gran parte del material de vidrio y metal, principalmente, del laboratorio) utilizaremos el autoclave.

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RECUERDA:

El autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con cierre hermético que permite trabajar con vapor de agua a alta presión y temperatura y que se utiliza para esterilizar material de laboratorio.

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Eppendorfs & microcentrífugas:

Los tubos Eppendorf son pequeños recipientes cilíndricos de plástico de alta calidad, que poseen un cierre hermético para evitar fugas y contaminación de la muestra que contienen. Las microcentrífugas son máquinas centrífugas de menor tamaño, que permiten directamente centrifugar estos recipientes, de menor tamaño y volumen que los tubos de ensayo.

prog 1 prog 2 300-2 1300. Centrifuge 5420 eppendorf

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Moldes para citocentrífuga:

Las citocentrífugas son equipos utilizados para concentrar células de muestras líquidas sobre un portaobjetos. Permiten separar los componentes celulares de una muestra líquida para concentrar el material citológico y mejorar su observación. Los moldes para citocentrífuga se usan para colocar el portaobjetos y la muestra dentro del equipo.

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Pistolas de punción-aspiración:

Este instrumento se utiliza para obtener muestras citológicas mediante punción. Con la pistola de punción-aspiración podemos obtener muestras de mama, tiroides, bazo, hígado ... por ejemplo. Se acopla a una jeringa de entre 10 y 20 mL con una aguja menor a 20 Gauge.

EXTRA: El Gauge es una medida que se aplica principalmente a las agujas hipodérmicas. Corresponde al número de catéteres que caben en umcm2İLERNA.

Bandejas portapreparaciones y bandejas metálicas:

Las bandejas portapreparaciones se utilizan para almacenar y conservar las muestras en portaobjetos, y suelen ser de plástico o cartón. También se utilizan de forma frecuente en los procesamientos citológicos las bandejas metálicas "multiusos" fabricadas en acero inoxidable, que, efectivamente, se pueden utilizar para diversas tareas.

Reactivos para Procesamiento Citológico

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Formaldehído:

CHO P.M. MI Formaldehído Formaldehyde 2200 Reactivo Analítico, A.C.S. 1L Cas: 50-00-0 Cumple especificaciones de la A.C.S. Lote No. 2621-F2200 Contarich 37.72 Acidez (como Acido Formico) 225℃ - Apariencia Cristalino Densidad 25°C Contenido 10-15% Metanol Sulfato (SO, Metales pesados (como Pb) COLOR DE ALMACENAJE ROJO Es un compuesto químico altamente volátil, muy inflamable y de olor penetrante que, en condiciones normales es un gas incoloro. Tiene la capacidad de penetrar fácilmente en los tejidos bloqueando el proceso lítico de los mismos, por lo que se utiliza como conservante de muestras que serán procesadas para citología o histología.

Las disoluciones acuosas al 40% de formaldehído se conocen como Formol. Esta sustancia se clasifica como carcinógeno, mutágeno, corrosivo e irritante cutáneo, por lo que debe estar adecuadamente etiquetada y todos los trabajadores expuestos a ella, deberán conocer sus normas de manejo, seguridad, prevención de riesgos ... etc.

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Alcohol etílico:

También conocido como etanol, es un líquido incoloro, inflamable, y volátil que en muestras citológicas es el principal fijador.

Esta sustancia preserva el glucógeno, las propiedades antigénicas del tejido y algunas enzimas, por lo que lo podemos utilizar para estudios de inmunohistoquímica.El alcohol etílico tiene la capacidad de penetrar rápidamente en los tejidos, deshidratándolos y fijándolos de manera simultánea.

Es importante manipular este compuesto en condiciones de seguridad ya que puede provocar daños en el sistema nervioso central, irritación ocular ADBAQUIM S.A.S Quimbos, reactivas y equipes de laboratorio Etanol LOTE: 2136 FAB : 15/12/2020 TER AM 1

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Acetona:

ACETONA PURA CH3 Es un compuesto químico del grupo de las cetonas que en condiciones normales es un líquido incoloro de olor muy característico dulzón. Volátil, inflamable, suele utilizarse como solvente y fijador. Tiene la capacidad de precipitar proteínas, y en cuanto a las células, modifica muy poco la estructura antigénica del tejido y la actividad enzimática, algo muy positivo. Su desventaja es que genera una gran contracción de las mismas lo que puede inutilizar la muestra para la observación al microscopio óptico.

Xilol:

LEON XILOL LETE P.F 500 ml Este compuesto derivado del benceno, es un líquido incoloro e inflamable. Es un rápido aclarante, aporta consistencia y no produce alteraciones en la muestra. Como aspecto negativo puede volver quebradizos algunos tejidos y se trata de un compuesto tóxico por inhalación que puede provocar cefaleas, náuseas e irritabilidad.

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Colorantes:

Crange G 1 L "Hratoxilina de Hama -361L Utilizados tanto para técnicas de histotecnología y citotecnología, son sustancias químicas capaces de teñir tejidos y células, permitiendo visualizar estas estructuras bajo el microscopio. Algunos ejemplos son: hematoxilinas, eosina, Giemsa, eosina alcohólica (EA50), azul de bromocresol, verde de malaquita, orange G, .. entre muchos otros.

Medios de montaje:

ADBAQUIM S.A.S Bálsamo de Canadá Los medios de montaje son sustancias utilizadas para unir de forma rápida y permanente el portaobjetos con la preparación y el cubreobjetos. Pueden ser miscibles en agua (como la glicerina), o, más frecuentemente, no miscibles en agua (como el bálsamo de Canadá, o las resinas)

Equipos para Procesamiento Citológico

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Los equipos del laboratorio más utilizados en el procesamiento citológico son:

• Centrífugas y citocentrifugas
• Estufas y neveras
• Cámara húmeda de incubación: que mantiene condiciones de Ta y humedad.
• Microscopio óptico
• Fotomicroscopio: También conocido como microscopio trinocular, es un microscopio óptico que tiene una cámara fotográfica acoplada, lo que permite realizar microfotografías de una gran calidad.

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Los equipos del laboratorio más utilizados en el procesamiento citológico son:

• Balanzas
• Peachímetro: Aparato que nos permite medir el pH de las disoluciones, de los reactivos, las muestras, cultivos, etc.
• Sistema de tinción y lectura automática: Sistemas que permiten realizar una tinción automática y de gran calidad de la muestra colocada en un portaobjetos.
• Homogeneizador: equipo que consigue, mediante métodos mecánicos, la rotura de las membranas celulares con el menor daño posible. Se usa principalmente para la extracción de ADN y ARN y en toxicología.

Procesado General del Material Citológico

Tipos de Muestras Citológicas

En el laboratorio de anatomía patológica se reciben no sólo biopsias, como habíamos visto, sino también citologías y líquidos orgánicos para el estudio, recuento, o análisis celular.

Los protocolos más comunes están relacionados con muestras cervicovaginales y endometriales, con la boca, el aparato digestivo, de las vías respiratorias, muestras de orina, de líquido cefalorraquídeo, y derrames como el líquido ascítico, pleural, pericárdico y articular.

En función del tipo de muestra y de la finalidad diagnóstica, podemos agrupar los procesos en tres grandes grupos:

• CITOLOGÍA EXFOLIATIVA CORPORAL
• LÍQUIDOS CORPORALES Y ORINAS
• MUESTRAS DE VÍAS RESPIRATORIAS