Buenas prácticas de pipeteo: tipos, funcionamiento y mantenimiento

Buenas prácticas de pipeteo

Tipos de pipetas

BRAND

• Tipos de pipetas
• Principio de funcionamiento
• Exactitud
• Fuentes de error
• Manejo / Técnicas de pipeteo

Mantenimiento y limpieza

• Control y monitoreo
• Resumen

10-01Tipos de pipetas

Pipetas

Blaubrand® Cl. A Transferpette® S Transferpette® electronic Transferpettor® HandyStep® electronic / Touch HandyStep® S 2000

burserpette" S ao a Naj Transferpette"S IC -

Pipetas de vidrio graduadas / aforadas

Pipetas monocanales / multicanales

Pipetas electrónicas monocanales / multicanales

Transferpettor 3 ml 10.0 0 (11111

Pipetas de desplazamiento positivo

Dispensador manual / electrónicos

® BRANDTipos de pipetas

Vertido y descarga

Descarga por gravedad Cojin de aire Desplazamiento positivo

No hay contacto directo del émbolo con el líquido

El embolo tiene contacto directo con en líquido

® BRANDTipos de pipetas

Transferpelle' S ü Transterpette" S [ES Transferpettor aa C HandySitna

Soluciones acuosas, ácidas, alcalinas y solventes compatibles. Ampliamente utilizadas.

Para medios críticos y suspensiones. Soluciones de alta viscosidad o alta presión de vapor. Para medios que producen espuma.

Ideales para la dosificación en alícuotas y en largas series de pipeteado. Es posible dosificar líquidos de alta viscosidad o de alta presión de vapor.

® BRANDTipos de pipetas

Selección de pipetas

• En cuanto al líquido
• En cuanto al rango de volumen
• En cuanto al número de dosificaciones

Transferpetto"S 200

Unproblematic liquids (air displacement device)

Single delivery

Repeated delivery in succession or in parallel

Transferpette® S (manual; 0.1 μl - 10 ml)

Transferpette® electronic (electronic; 0.5 ul - 5 ml)

Delivery in parallel

Delivery parallel and repeated

Repeated delivery of a volume in succession

Tansferpette®S multi-channel (manual; 0.5 μl - 300 μΙ)

Transferpette® electronic (electronic; 0.5 μl - 5 ml)

Transferpette® electronic multi-channel (electronic; 0.5 μl - 300 μΙ)

Transferpette® electronic multi-channel (electronic; 0.5 μl - 300 μΙ)

HandyStep® touch / HandyStep® touch S (electronic; 1 μί - 50 ml)

Problematic liquids (positive displacement device)

Individual dispensing

Repeated delivery

Transferpettor (manual; 1l - 10 ml)

Repeated delivery equal volumes

Repeated delivery different volumes

HandyStep® S (manual; 2 ul - 5 ml)

HandyStep® touch S (electronic; 1 µl - 50 ml)

HandyStep® touch/ HandyStep® touch S (electronic; 1 ul - 50 ml)

® BRANDExactitud y tolerancia

® BRAND

1 6 5 0.0

1.000μl (1ml)

Pipeta aforada Cl. A 1ml

Pipeta grad. Cl. A 1ml

Transferpette S 100-1000ul

Transferpette elect. 100-1000ul

Transferpettor 200-1000ul

HandyStep® touch PD-tip : 1ml / 50ml

E ≤±% 0,6 0,7 0,6 0,6 0,5 0,6 1,5

Εξ + μ 6 7 6 6 5 6 15

10.000ul (10ml)

Pipeta aforada Cl. A 10ml

Pipeta grad. Cl. A 10ml

Transferpette S 1.000-10.000ul

Transferpette electronic

Transferpettor 2.000-10.000ul

HandyStep® touch PD-tip 10ml / 50ml

E ≤±% 0,2 0,3 0,6 - 0,5 0,5 1,5

E ≤ ± ul 20 30 60 - 50 50 15Exactitud y tolerancia

Tolerancia según la DIN EN ISO 8655-6

Vol. 1 2 5 10 20 50 100 200 500 1000 2000 5000 10000

E ≤ ± % 5,0 4,0 2,5 1,2 1,0 1,0 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,6

Según BRAND (Transferpette® S):

Vol. μί 1 2,5 10 20 50 100 200 1000 2000 5000 10000

E ≤ 2,0 1,4 1,0 0,8 0,8 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6 0,6

± % * Los límites de error se aplican a instrumentos nuevos bajo condiciones ideales de ensayo (procedimiento correcto, técnico capacitado y ambiente controlado). Normalmente los valores se reducen a la mitad de la norma

® BRAND

Transferpetto"S 200 XExactitud y tolerancia

ISO 8655: 2022

Norma internacional para la calibración y testeos de los equipos volumétricos operados por émbolo/pistón (pipetas, buretas, dispensadores ... ).

• La Parte 2 incluye Pipetas de camara de aire y desplazamiento positivo.
• Pipeta y punta constituyen un sistema único. ( Informaciones mas claras acerca de las puntas (fabricación, calibración y uso).
• Errores máximos permitidos para 100%, 50% y 10% del volumen.
• La nueva ISO8655:2022 describe dos procedimientos referencia de calibración: gravimétrico y fotométrico.
• Requiere mejores balanzas.

Parte 1 Terminologia, requerimientos generales

Parte 2 Pipetas

Parte 3 Buretas

Parte 4 Diluidores

Parte 5 Dispensadores

Parte 6 Procedimiento gravimétrico para determinación del volumen

Parte 7 Procedimientos alternativos para la determinación del volumen

Parte 8 Procedimiento fotométrico para la determinación del volumen

Parte 9 Jeringas para laboratorioExactitud y tolerancia

Límites de error

Atención !!! Los límites de error varían dentro del rango de volumen del equipo. Volúmenes más bajos presentan errores más altos.

Transferpetto"S 200 PAND

Ejemplo: Tolerancia fabricante Transferpette S BRAND 100ul:

Vol. ul E ≤±% E ≤ ± ul 100 0,6 0,6 50 0,8 0,4 10 3 0,3

® BRANDExactitud y tolerancia

HandyStep Touch: Tabla de precisión

Exactitud E ≤± % Coeficiente de variación CV ≤ % Puntas PD // Rango de volumen Subdivisión Volumen nominal 100% 50% 10% 1% Volumen nominal 100% 50% 10% 1%

0,1 ml 1 μl - 100 μl 0,1 μl 1,0 1,0 1,6 8,0 0,5 1,0 2,0 12,0

0,5 ml 5 μl - 500 μl 0,1 μl 0,9 0,9 1,0 5,0 0,3 0,6 1,0 5,0

1 ml 10 μl - 1000 μl 1 μί 0,6 0,9 1,0 5,0 0,2 0,5 0,8 4,0

1,25 ml 12 μl - 1250 ml 0,5 μl 0,6 0,6 0,9 5,0 0,15 0,5 0,7 4,0

2,5 ml 25 μl - 2500 μl 1 μί 0,5 0,6 0,7 3,5 0,15 0,3 0,6 3,0

5 ml 50 ml - 5000 μl 1 μl 0,5 0,5 0,7 3,5 0,15 0,4 0,7 3,0

10 ml 100 μl - 10 ml 10 μl 0,4 0,5 0,7 3,5 0,15 0,5 0,8 4,0

12,5 ml 125 ul - 12,5 ml 5 μl 0,5 0,5 0,8 3,5 0,15 0,6 1,4 6,5

25 ml 250 μl - 25 ml 10 μl 0,5 0,5 0,6 3,0 0,15 0,3 1,0 6,0

50 ml 500 ml - 50 ml 10 μl 0,5 0,5 0,5 3,0 0,15 0,4 1,2 9,0

Las mediciones se han llevado a cabo con la punta PD II de BRAND. El volumen nominal es el volumen máximo impreso en la punta PD. No se superan los niveles de tolerancia estipulados en la norma ISO 8655.

® BRAND

HondySlep'Fuentes de error

Factores que influyen en el pipeteado

• Personalidad, experiencia y tipo de pipeta
• Presión atmosférica
• Inclinación y profundidad de inmersión
• Humedad
• Tiempo de espera
• Temperatura y densidad del líquido
• Condicionamineto / pre-enjuague
• Compatibilidad de la punta
• Limpieza y mantenimiento de la pipeta
• Características de la pipeta (ex: aislamiento térmico)

® BRANDFuentes de error - Experiencia y tipo de pipeta

Experiencia y tipo de pipeta

Pipeta manual Imprecisión % 3 2 1 0 1000 500 200 100 10 Vol. (pl) Principiantes Experiencia moderada Experimentados

Pipeta electronica Imprecisión % 3 2 1 0 1000 500 200 100 10 Vol. (pl)

® BRANDFuentes de error - Presión atmosférica

Presión atmosférica

0.1 mm Overview pressure dependence of accuracy air interface pipette

Altitud e Air pressure 10 ml 1000μ 100μ - 20ml yellow 20μl crystal [m] [hPa] Tolerance [%] nominal volume 0.6 0.6 0.6 0.8 0.8 Accuracy [%] nominal volume

Chupiquinamine (Chile) 5600 498 -2.4 -1.4 -1.2 -2.3 -3.1

Wentschuan (Tibet, China), La Riconada (Peru) 5100 533 -2.1 -1.2 - 1.0 -2.0 -2.7

Lhasa, La Paz 3700 641 -1.3 -0.8 -0.6 -1.3 -1.7

Jungfraujoch (CH) 3500 658 -1.2 -0.7 -0.6 - 1.2 -1.6

Bogotà 2600 738 -0.9 -0.5 -0.4 -0.8 -1.1

Los Alamos Nat. Lab. 2500 747 -0.8 -0.5 -0.4 -0.8 -1.1

Addis Abeba 2400 756 -0.8 -0.4 -0.4 -0.8 -1.0

Mexico City, Sanaa 2300 766 -0.7 -0.4 -0.4 -0.7 -1.0

Samedan (CH), Johannesburg 1700 825 -0.5 -0.3 -0.3 -0.5 -0.7

Teheran 1200 877 -0.4 -0.2 -0.2 -0.3 -0.5

Munich 518 953 -0.15 -0.08 -0.07 -0.14 -0.19

Hamburg 0 1013 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

En Bokek (Israel) -390 1061 0.10 0.06 0.05 0.10 0.13

® BRAND

IFuentes de error - Inclinación y profundidad

Inclinación y profundidad

Si la pipeta se encuentra inclinada durante la aspiración del líquido, la presión hidrostática sobre la columna (altura) del liquido cambia, resultando um incremento en el volumen. Ejemplo para una pipeta de 100ul, ángulo 60º: DV = +0,53ul

La profundidad de inmersión afecta la altura final del nivel del líquido en la aspiración, llevando a un cambio del volumen. Ese efecto es más importante para pipetas de bajo volumen.

Correct Too Deep Angled 1 Lifting Height -

® BRANDFuentes de error - Humedad

Humedad ambiental

Una alta humedad del ambiente lleva a un mayor equilibrio de la humedad en el aire cautivo dentro de la punta y menos evaporación durante la aspiración y el tiempo de espera. Volúmenes mayores se obtienen cuanto más alta sea la humedad externa. Además, la influencia de los efectos iniciales y el tiempo de espera son reducidos con la alta humedad del ambiente.

Ejemplo: Pipeta 20ul, humedad relativa 10% Evaporación = 2,9 x 10-5 × 3,3 x 1300= 0,12ul/s

Humedad relativa % Tasa de evaporación mg/s . mm2 10 2,9 x 10-5 60 1,1 x 10-5 100 0

® BRANDFuentes de error - Tiempo de espera e inmersión

Tiempo de espera e inmersión

Cuanto mayor el tiempo de contacto del líquido con el cojín de aire dentro de la punta, más evaporación ocurre, resultando una perdida de volumen del líquido pipeteado. Tiempos de inmersión muy largos resultan volumenes más bajos.

Tiempo de espera: es el tiempo que la punta se queda dentro del líquido después de la aspiración. El tiempo de espera depende del volumen de la pipeta y está determinado para que el nivel del líquido en la punta se estabilice después de la aspiración y que no resulte en perdida de volumen.

Delivered volume [ul] 20 î 95 % 19 55 % 18 5 % 17 16 0 60 120 180 Time [s]

Dependencia del tiempo de inmersión en una pipeta de 20ul para ambientes de humedad 5%, 55% y 95%.

® BRANDFuentes de error - Temperatura del líquido

Temperatura del líquido

Delivered volume [ !!! ] 205 200 HH T 195 190 0 5 10 15 20 25 30 Water temperature [C] unrinsed pipeta/sala: 28℃

Una de las mayores fuentes de error es la diferencia de temperatura entre el líquido y el instrumento (aprox. 3% desviación /1K de diferencia). El cambio de temperatura del aire cautivo durante la aspiración influye ampliamente en el volumen aspirado.

Se nota un efecto distinto para puntas rinsed y pre-rinsed. La diferencia de temperatura pipeta/ambiente muestra una menor dependencia. La densidad de algunos líquidos varía sensiblemente ocasionando errores importantes en la medición.

® BRANDFuentes de error - Condicionamiento / pre-enjague

Condicionamiento / pre-enjuague

Volumen (pl) 100.2 100 99.8 99.6 99.4 99.2 99 0 2 4 6 8 10 12 Nr. pre-enjuagues

® BRAND