Técnicas de análisis hematológica: enfoque en la anemia y diagnóstico

TÈCNIQUES D'ANÀLISI HEMATOLOGICA

ANÀLISI HEMATOLÓGICA DE LA SÈRIE VERMELLA

• Anèmies: definició, símptomes i classificació
• Anèmies arregeneratives : tipus i tècniques de diagnostic al laboratori

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: definició

Disminució de la concentració d'hemoglobina a la sang periferica per sota dels limits acceptats com a normals segons l'edat, el sexe i la zona geográfica

Criteri diagnostic determinat per l'OMS:

• Home adult: < 13 g/ dL
• Dona adulta: < 12 g/ dL
• Embarassades: < 11 g/ dL
• Nens: 6-59 mesos (<11 g/ dL ) / 5-11 anys (11,5 g/ dL ) / 12-14 anys (12 g/ dl )

SOL implicar la baixada de: recompte hematies, hematocrit

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: definició

Consideracions sobre l'anèmia

Sí que es considera anèmia ... · Disminució BRUSCA d'almenys 2 g/ dL d' Hb habituals de l'individu -> Dins l'interval de referência

No es considera anèmia ... · Hemodilució (1 volum plasmatic): embaràs, hipoalbuminemia > Inferior a l'interval de referência · Hemoconcentració ( volum plasmatic): deshidratacións cremats > Superior a l'interval de referencia

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: mecanisme

Desequilibri entre:

Producció d'hematies a la medul·la òssia (ENTRADA)

Pèrdua d'hematies (SORTIDA)

Destrucció a l'SMF

Pèrdua de sang

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: símptomes

Els simptomes són resultat de la hipoxia tissular ↓ Mecanismes compensadors

• Increment de capacitat d' Hb per cedir O2: desviació de corba de saturació O2
• Augment dl rendiment cardiac
• Augment de l'eritropoesi (si no està afectada la producció d'hematies)

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: símptomes

Signes i símptomes per sistema afectat

Sistema afectat	Signes i símptomes
Pell i mucoses	PALIDESA, icterícia (només anèmies hemolítiques)
Sistema muscular	Cansament, debilitat muscular generalitzada, rampes, intolerancia a l'esforç
Sistema cardiovascular	Dispnea d'esforç , insuficiencia cardíaca, arrítmies (taquicardia), hipotensió, xoc hipovolèmic
Sistema nerviós	Marejos, cefalea, dificultat per concentrar-se
Sistema gastrointestinal	Anorexia, digestions pesades, nausees, restrenyiment
Sistema genitourinari	Amenorrea, pèrdua de libido, retenció de líquids, oligúria

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: símptomes

Intensitat dels símptomes

La intensitat dels símptomes depèn de: · Concentració d'hemoglobina · Velocitat d'instauració

Anèmia aguda (+ símptomes)

VS

Anèmia crònica (asimptomatica)

· Edat i estat cardiovascular previ

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia: tipus

Classificació segons el mecanisme

• ARREGENERATIVES O CENTRALS. Origen medul·lar > Fallada en l'eritropoesi. Reticulocits <2%

Insuficiência medul·lar

Carencials

Desplaçament medul·lar

• REGENERATIVES O PERIFÈRIQUES Origen perifèric -> Destrucció d'hematies. Augment de reticulocits >2%

Hemorràgiques Hemolítiques

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Recompte de reticulòcits

Determinació manual de reticulòcits

Determinació manual: · Tinció supravital amb blau cressil brillant

Passos: 1. En un tub, barrejar solució colorant i sang en proporció 1/1 2. Incubar 5 min. a 37ºC al bany maria 3. Homogeneïtzar la mostra i fer una extensió en un porta 4. Deixeu assecar

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Determinació de reticulòcits

Tenyir abans de 6 hores (maduració in vitro) ↓ Estructures granulars o filamentoses blaves

Recompte de reticulòcits # policromàsia en tinció de May Grünwald-Giemsa

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Recompte de reticulocits

Determinació automatitzada de reticulòcits

Determinació automatitzada: . Tinció de l'ARN amb colorants i fluorocroms ( auramina O, taronja de tiazol , oxazina 750, etc ) · Contatge mitjançant citometria de flux amb mesura de dispersio de llum · Separació d'hematies (fluorescencia), plaquetes (mida) i leucocits (fluorescencia i mida)

FSC RBC RET PLT SFL

Unitats: reticulòcits /L o % respecte al total d'hematies

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Recompte de reticulòcits

Relació mida cel·lular-fluorescencia

Determinació automatitzada: · Relació mida cel·lular-fluorescencia:

HFR -> MFR -> LFR

Immaduresa Maduresa

· Fracció de reticulocits immadurs : HFR + MFR. Proporció de reticulocits immadurs respecte al total ↓ Grau de resposta medul·lar a l'anemia

FSC IRF 7 RBC ELFR MFR HFR L - RET #,% - PLT SFL

Valors de referencia: - 50-100x10 9 /L - 0.5-2.5%

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmies per insuficiencia medul·lar

Fracas de la funció hematopoètica

· Fracas de la funció hematopoètica (qualsevol de les tres series)

Tabla I. Clasificación de las principales insuficiencias medulares cuantitativas

Insuficiencias medulares	Adquiridas	Congénitas o constitucionales
Globales	· Aplasia medular adquirida	· Anemia de Fanconi · Disqueratosis congénita
Selectivas	Eritroblastopenias · Aplasia pura de la serie roja	. Síndrome de Blackfan-Diamond
Trombocitopenias	· Idiopática	· Amegacariocítica + ausencia del radio
	· Farmacológicas/ tóxicas
Neutropenias	· Idiopática	· Síndrome de Kostmann
	· Farmacológicas/ tóxicas	· Disgenesia reticular · Síndrome de Shwachman-Diamond

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmies per insuficiencia medul·lar

Insuficiències medul·lars adquirides

Adquirides · Dos mecanismes: Autoimmune Tòxic · Causa: 70% idiopàtiques 30 %: secundàries a radiació, farmacs ( quimioterapia ), toxics, productes químics, virus, etc · Diagnostic de laboratori · Citopènies a SP: una, dues o les tres línies cel·lulars ( pancitopenia ) · Medul·la ossia hipocel·lular · Descartar altres causes

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmies per insuficiencia medul·lar

Anèmia de Fanconi

Congènites > Anemia de Fanconi Pancitopènia + predisposiciónvolupament de tumors + malformacions congènites · Etiologia: mutacions en gens que determinen un defecte en la reparació del DNA · Diagnostic: estudis citogenètics de ruptures cromosòmiques espontànies ( diepoxibutà o mitomicina C)

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmies carencials

Anèmia per deficit de ferro (ferropènia)

METABOLISME DEL FERRO - Fases: · Ingestió i absorció intestinal · Transport, distribució i captació cel·lular · Ús i emmagatzematge · Reciclatge · Pèrdues

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Presència de ferro a l'organisme

Formes de ferro i la seva funció

Formes de ferro	Tipus ferro	Funció	Proteïnes en què està
		Transport O 2	Hemoglobina
		Magatzem O 2	Mioglobina
Hemo		Cofactor enzims	Catalases i peroxidases
		Transport e -	Citocroms
		Dipòsit ferro	Ferritina
No hemo (iònic)			Hemosiderina
		Transport ferro	Transferrina

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Ingestió i absorció de ferro

1. Ingestió i absorció · Dos estats d'oxidació Fe 2+ (ferrós) <> Fe 3+ (ferric) + e - 10-20 mg Fe/dia Dieta adequada 1-2 mg/dia Total absorbit Absorció 10% · Diversos factors influeixen en la proporció de ferro absorbit (ferro hemo vs no hemo / substàncies) · Transportador de Fe 3+ > Ferroportina ( enteròcits , macrofags, altres cellules)

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Transport, distribució i captació cel·lular

2. Transport, distribució i captació cellular · Viatja en sang unit a transferrina (Tf-Fe 3+ ) -> 2 àtoms Fe 3+ · Captació per precursors eritroides > Receptor de transferrina (TfR1)

COOH COOH Diferric transferrin Transferrin binding site Soluble isoform TfR1 protein (760 amino acids) Arg 100 Arg 100 Cleavage site SS Cys 98 Cys 89 Cys 98 Cys 89 Plasma membrane Disulfide bonds NH2 NH2 Abbreviations: Arg, arginine; Cys, Cysteine. Adapted from (8). Fig. 1. Transferrin receptor 1 (transmembrane and soluble form).

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Receptor soluble de la transferrina (sTfR)

2. Transport, distribució i captació cel·lular

Receptor soluble de la transferrina ( sTfR ) Libre en sangre · La seva concentració plasmatica reflecteix la quantitat de receptors cel·lulars ( eritroblasts )

Transferrin Iron TfR1 dimer STfR

· Augmenta a: - Ferropènia (para transportar más rápidamente el Fe que hay) - Eritropoesi augmentada sense ferropènia

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Ús i emmagatzematge de ferro

3. Ús i emmagatzematge A l'interior cel·lular, el ferro es pot fer servir per a ...

Ús metabolic (sobretot eritroblasts )

Emmagatzematge

Transport al plasma

... dependent del tipus cellular i les necessitats: · Macròfags (SMF), enteròcits > Mobilitzadores de ferro al pool plasmàtic · Hepatocits, cèl·lules musculars > Acceptores de ferro

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Formes d'emmagatzematge i reciclatge

3. Ús i emmagatzematge

Dues formes d'emmagatzematge

Ferritina Sintesi hepatica Facilment mobilitzable Reactant de fase aguda

Hemosiderina Derivada de la ferritina Difícil de mobilitzar No reactant de fase aguda

4. Reciclatge Els hematies moren als 120 dies Fagocitosi per SMF (melsa) > Macròfags alliberen de nou el Fe 2+ per al seu ús en l'eritropoesi

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Visió global metabolisme del ferro

DIPÒSIT - Ferritina i hemosiderina

ÚS - proteïnes

DIPÒSITS Fetge Músculs Cèl·lules i teixits

Descamació

ABSORCIÓ (1-2 mg/dia)

INGESTIÓ (10-20 mg/dia)

DISTRIBUCIÓ Plasma Transferrina

PÈRDUES (1-2 mg/dia)

REUTILITZACI f

ÚS Medul·la ossia (eritropoesi - grup hemo )

Altres perdues

Macròfags (sistema reticuloendotelial )

Menstruació

Eritròcits

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Regulació del metabolisme del ferro a l'organisme

HEPCIDINA i el seu paper

HEPCIDINA (peptid hepatic)

Hipòxia (inhibeix hepcidina )

Estat del ferro

Inflamació

Dipòsits de ferro hepatòcits

1 Ferro sèric

T

Vies de senyalització intracellular

Hepcidina -> Inhibeix ferroportina

Absorció de ferro

Ferro sèric

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia ferropènica

Fases i causes de la ferropènia

· Fases de la ferropènia

Normal Depleción férrica Eritropoyesis ferropénica Anemia ferropénica

Reservas Transporte Eritrocitos

· Causes: · Augment de perdues: menstruació (dones joves), hemorragies digestives, etc · Disminució d'aportacions dieta: nens a països rentes baixes · Augment necessitats: major predisposiciónbaràs, adolescencia) · Disminució absorció intestinal: gastritis, malaltia celíaca, malaltia inflamatoria intestinal (EII)

Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona

Anèmia de trastorns crònics (inflamatoria)

Mecanisme i causes

· Mecanisme: hay hierro pero no se puede utilizar Augment citocines proinflamatories > Secreció HEPCIDINA > Segrest de ferro en SMF i disminució d'absorció > Eritropoesi ferropènica

· Causes -> Processos inflamatoris cronics · Malalties autoimmunes: artritis reumatoide, lupus, MII, hepatitis, vasculitis etc · Infeccions · Neoplasies: hematologiques i no hematologiques · Altres: obesitat, envelliment * Frequent en pacients hospitalitzats i ancians

J Hospital del Mar Institut FP Sanitària Barcelona