Histología: Obtención y Coloración de Muestras de Tejido Humano

¿Qué es la Histología?

Etimológicamente: histo= tejido
logos: estudio
Es la rama de la biología encargada del análisis
microscópico de la anatomía celular y tisular de los tejidos
biológicos.

Obtención de la muestra de material humano

El material
humano puede provenir de tres fuentes:

• Las necropsias
  - son las piezas que se obtienen de un cadáver.
• Las biopsias
  - son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con
  vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y
  efectuar un diagnóstico histopatológico
• Las piezas operadas.
  - son los tejidos que han sido extraídos de las
  intervenciones quirúrgicas, generalmente tumores u
  órganos inflamados, también pueden darnos material de
  investigación.

Técnicas Histológicas

Introducción al estudio de la Histología

HISTOLOGIA
"estudio del tejido"
Es la rama de la Anatomía que estudia los tejidos
de los Animales y las Plantas

ANATOMIA MICROSCOPICA

Técnica Histológica

ES EL CONJUNTO DE PROCEDIMIENTOS
REALIZADOS PARA OBTENER UN
PREPARADO HISTOLOGICO

Preparado Histológico

PREPARADO HISTOLOGICO:
Es una rebanada de tejido colocada sobre una lámina
portaobjetos, coloreada y cubierta por una lámina
cubre-objetos.

EEF

Etapas de la Técnica Histológica

• ETAPAS DE LA TECNICA HISTOLOGICA

1. OBTENCION DEL MATERIAL
2. FIJACION
3. OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
4. CORTE
5. COLORACION
6. MONTAJE

Fijación de la Muestra de Tejido

SI LA MUESTRA DE TEJIDO
NO SE FIJA
SE FIJA
AUTOLISIS
CONSERVA LAS
CARACTERISTICAS
Ice
MIL

Condiciones de un Buen Fijador

V CONDICIONES DE UN BUEN FIJADOR:
Preservar el tejido
No producir artificios
No dificultar el tratamiento ulterior
Poder y velocidad de penetración
SOLUCION AL 40% DE ALDEHIDO FORMICO
USO
FORMOL AL 10%

Obtención del Bloque de Parafina

3. OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
P
DESHIDRATACIÓN
S
ACLARAMIENTO
IMPREGNACION
INCLUSION EN PARAFINA

Proceso de Inclusión en Parafina

3. OBTENCION DEL BLOQUE DE PARAFINA
TEJIDOS (Ricos en agua)
DESHIDRATACIÓN
TEJIDOS RICOS EN ALCOHOL
ACLARAMIENTO
TEJIDOS RICOS EN XILOL
IMPREGNACION EN PARAFINA

Luego de la Impregnación se Incluye en
parafina, en pequeños cubos que forman el
BLOQUE DE PARAFINA

El Corte Histológico

B. - Se coloca en el Baño de María
4. EL CORTE
RATIOHAL CALOHIK G.A.
C. - Se monta el corte en la
lámina Portaobjetos
ВОТЕЦИО АТЯОЧ
A. - Se corta en el microtomo

SECCIÓN O CORTE
DESCTOIA
COVID

Montaje

174
421174
1175
421176
42
421149
A / HE
AC
F
-
-
...
421162
421173
421173
42117

Coloración Histológica

5. COLORACION:
COLORANTE
ES UNA SUSTANCIA CAPAZ DE
COMUNICAR SU COLORACION
A OTROS CUERPOS
La coloración más usada es
HEMATOXILINA - EOSINA

Hematoxilina y Eosina

5. COLORACION
HEMATOXILINA
Colorante BÁSICO
tiñe de
Azul o púrpura,
elementos ácidos
Ej. El Núcleo
EOSINA
Colorante ACIDO,
tiñe de
Rosado o Rojo
elementos básicos
Ej. Citoplasma

Fundamentos Químicos de la Coloración

Clasificación de Colorantes

Clasificación
afinidad:
colorantes
según
Colorantes
nucleares
o
básicos:
SU
componente colorante activo es una
base' coloreada que se combina con los
ácidos nucleicos.
Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su
componente
activo
es
un
ácido
coloreado
que se combina con el
citoplasma.
Colorantes neutros, tanto el ácido como
la base son coloreadas.

Elementos Basófilos y Acidófilos

Entonces:
Elementos que se tiñan
con colorantes
básicos (ej.
Hematoxilina) son
basófilos:
La Heterocromatina y
los Nucléolos por los
grupos Fosfato
ionizados.
Ribosomas por grupos
Fosfato ionizados.
Matriz del Cartílago
por grupos Sulfato
ionizados
Elementos que se tiñan
con colorantes ácidos (ej.
Eosina) son acidófilos:
La mayor parte del
citoplasma no
especializado.
Filamentos Citoplasmáticos.
Fibras extracelulares. Todos
estos debidos a grupos
Amino ionizados.

Metacromasia

Fenómeno por el cual un colorante cambia de
color tras reaccionar con un componente tisular.
Se
debe
a
que en
tejidos
con
altas
concentraciones de POLIANIONES, la molécula
del colorante se polimeriza entre si y sus
propiedades de absorción son diferentes de las
propiedades de las moléculas individuales.
Cromótropos: por ejempo los
Glucosaminoglucanos
Sulfatados en la matriz del cartílago,
gránulos de los mastocitos (gránulos
color púrpura).

Cortes de Piel con Tinción Hematoxilina-Eosina

Stratum Granulosum
Stratum Corneum
Dermat
Papillae
Stratum Basale
Stratum Spinosum
Dermis
Piel: tejido epitelial
y conjuntivo
Cortes de piel
Tinción
Hematoxilina-Eosina

Pasos de la Coloración

PASOS DE LA COLORACION
V
DESPARAFINAR
V REHIDRATAR
V
HEMATOXILINA
V DIFERENCIAR
V EOSINA
V ALCOHOL
V
XILOL

Batería de Coloración

BATERIA DE COLORACION
Efecvanienee fe handling, place
chark i ble formi here to absorb ezcess fuldf

Montaje Final

6. MONTAJE
Con un pegamento especial
se coloca el Cubreobjeto
sobre el tejido que se
encuentra en el portaobjeto
J
M
BOTELHO ATSIOq

Cortes Histológicos

odino mixto
HEMATOXILINA-EOSINA

Cortes Histológicos con Hematoxilina-Eosina y Giemsa

www.lahistoteca.blogspot.com
Connective Tissue
(lamina propria)
Epithelium
(pseudostratified columnar)
cilia
5
4
blood vessels
HEMATOXILINA-EOSINA
Básico-Acido
1
3
2
Giemsa (neutro)

Tinción con Azul de Toluidina y Giemsa

ambas, Tinción con Azul de Toluidina:
gránulos de Mastocitos azul-púrpura
(metacromasia)
Giemsa
(Mastocytose)
Mastócito
Metacromasia

Histoquímica

• Histoquímica: Consiste en la detección a nivel óptico de
  enzimas y diversas sustancias, en los tejidos, con material
  fijado, mediante técnicas especiales para cada una de ellas.
  PAS
  Tricrómico
  Masson
  Argéntica:
  reticulina

Ejemplos de Tinciones Histoquímicas Especiales

EJEMPLOS DE TINCIONES HISTOQUIMICAS ESPECIALES

Tinción especial	Estructuras o componentes identificados
Van Gieson	colágeno y músculo liso
Fontana-Masson	melanina, argentafinidad
Perls	hierro
Sudan III/IV	lípidos
Azul Alcian	mucinas ácidas
Reticulina/plata	fibras reticulares
Mucicarmín	mucinas
PAS	glicógeno, mucopolisacáridos neutros
Verhoeff/orceína	fibras elásticas
Luxol fast blue	mielina

Técnicas Especiales

Inmunohistoquímica

• Inmunohistoquímica: Permite identificar
  sustancias o antígenos existentes en células o
  tejidos, tratando los cortes con anticuerpos
  monoclonales correspondientes, acoplados con
  una enzima (peroxidasa) con la que se
  identifica la localización tisular o celular de la
  sustancia o el antígeno buscado

Definición de Inmunohistoquímica

Inmunohistoquímica
Definición
Técnica de laboratorio
· Utilización de anticuerpos MARCADOS para
la detección de antígenos
· Inmuno-Histo-Química
· Reacción antigeno-Anticuerpo
· Cortes histológicos
· Cromógenos
Herramienta útil
· Detección de antigenos
· Proteínas y polisacáridos

Problemas de Interpretación en Técnica Histológica

Problemas Conceptuales: Tipos de Corte

PROBLEMAS DE INTERPRETACION
B. - CONCEPTUALES
Corte
transversal
Corte
longitudinal
000
J
Corte
oblicuo
Diagrama que muestra los diferentes
aspectos de cortes a través de un tubo
curvo en diferentes niveles

Problemas Conceptuales: Tamaño de Corte

PROBLEMAS DE INTERPRETACION
B. - CONCEPTUALES
Corte de 5 um
que atraviesa
una célula
de 15 um
3

Inmunofluorescencia

INMUNOFLUORESCENCIA
- Inmunofluorescencia: se realiza en tejido sin fijar, para
observar complejos antígenos anticuerpos depositados en
los tejidos en enfermedades autoinmunes. Se utilizan
anticuerpos fluoresceinados. Y MO de inmunofluorescencia

Microscopía Electrónica

MICROSCOPIA ELECTRONICA
Microscopia electrónica. Brinda información sobre
el interior de las células permitiendo el estudio de
las alteraciones ultraestructurales

Microscopio

COLTO
Ocular lens
Prism
Objective
lens
Specimen
slide
Stage
Condenser
- Light filter
Stage position
adjustment
Focus adjustment
knob
Illuminator
Mirror

Definición y Clasificación del Microscopio

COLTO
Un microscopio es un dispositivo encargado
de hacer visibles objetos muy pequeños.
Es el instrumento mas importante en la histología ,
debido al tamaño de las estructuras analizadas.
Se clasifica según el tipo de fuente luminosa que utilice.

Tipos de Microscopio

TIPOS DE MICROSCOPIO
Óptico
·Optico simple
·Óptico compuesto
Electrónico
·Electrónico de
transmisión
·Electrónico de barrido

Diagramas de Microscopios

Imagen en el ojo
Cátodo
Anodo
Lente ocular
Anodo
Lente
condensador
Lente
condensador
Espécimen
Serpentin de
exploración
Haz de
exploración
- Lente del-
objetivo
·Espécimen
Detector de
electrones
Amplificador
electrónico
Ventana para observación
Lente
condensador
Lente de
proyección
Espécimen
Lámpara
Espejo Imagen en-
la pantalla de observación
Imagen en
la pantalla de observación
Pantalla de
televisión
Microscopio de luz
Microscopio electrónico
de transmisión
Microscopio electrónico
de barrido

Componentes del Microscopio Óptico

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO OPTICO
I
T
Sistema óptico
Sistema de iluminación
Sistema mecánico
Cabezal
Brazo
Oculares
Revólver
Objetivos
Platina
Reguladores
de enfoque
(Macrométrico)
Condensador
Fuente de
iluminación
(Micrométrico)
Base

Sistema Óptico y de Iluminación

SISTEMA OPTICO Y DE
ILUMINACION
T
DE
TFOLAIT
HOTOLA
Ocular
Objetivos
Condensador
Fuente de luz
CHE2

Ocular

OCULAR
Es cilindro hueco metálico, provisto de una lente o un
sistema de lentes convergentes, cuya finalidad es aumentar
la imagen real e invertida enviada por el objetivo.
K
10X-T/18L
OLYMPUS
TAIWAN
55 60 65 70

Objetivo

0-OBJETIVO
ODCITAO
OL
10
A 40
0.65
160/0.17
40
Lente situada
cerca de la
preparación.
Amplía la
imagen de ésta
4X,
10X,40X,100X.

Condensador y Diafragma

CONDENSADOR Y DIAFRAGMA
DTHL
El condensador
concentra el haz
de luz sobre la
preparación y el
diafragma limita
el haz de rayos
que atraviesa el
sistema
de
lentes
eliminando
los
rayos
mas
desviados.

Sistema Mecánico del Microscopio

SISTEMA MECANICO
LICCHIATO
Cabezal
Brazo
Columna
Platina
Base

Componentes del Sistema Mecánico

Sistema Mecánico
Revolver
Tornillo
Macrométrico
Platina
Tornillo
Micrométrico
CHE2

Microscopio Electrónico

MICROSCOPIO
TC
T
ELECTRONICO

Poder de Resolución

IPODER DE RESOLUCION
LODEV DE VEDAFACTOLA
Capacidad de un lente o sistema óptico del
microscopio
de separar claramente dos
puntos
que se encuentran muy próximos. la
resolución esta limitada por la longitud de
onda de la luz ,la apertura numérica del
objetivo y el grosor del espécimen observado.

Diferencias entre Microscopio Óptico y Electrónico

Microscopio Óptico
Microscopio electrónico
Utiliza un haz de luz.
Utiliza un haz de electrones.
Utiliza lentes de cristal.
Utiliza lentes electromagnéticas.
La imagen se observa de forma directa.
La imagen se registra en una placa
fotográfica
Proporciona aumentos de hasta 1400 X
Proporciona aumentos de hasta 500000 X
Posee un poder de resolución de
aproximadamente 0.2 micras
Posee una resolución de
aproximadamente 0.2 nanómetros

Diferencia entre las Imágenes Observadas

Diferencia entre las
imágenes observadas
dreams
dreamstime
M.O
M.E.T
M.E.B

Comparación de Imágenes de Microscopía

2
2
1
2
www.lahistoteca.blogspot.com
Macroscópico
Microscopio
óptico
Microscopio
electrónico

Comparación de Imágenes de Espermatozoides

COMPARACION DE IMÁGENES DE MICROSCOPIA OPTICA
ELECTRONICA DE TRANSMISION Y ELECTRONICA DE
BARRIDO. ESPERMATOZOIDES
M.O.
E.TRANSMISION
E. BARRIDO