Citogenetica oncoematologica: anomalie cromosomiche e neoplasie ematologiche

CITOGENETICA ONCOEMATOLOGICA

ONCOEMATOLOGIA

ONCOEMATOLOGIA: Ramo della medicina che si occupa dei tumori del sangue e degli organi che lo producono Le neoplasie ematologiche sono tumori che colpiscono le cellule del midollo osseo, il sistema linfatico e il sistema immunitario. Le neoplasie ematologiche derivano dalla proliferazione e dalla sopravvivenza di due principali citogenesi del sangue: linee di cellule mieloidi e linfoidi.

LEUCEMIA

LEUCEMIA: cancro dei tessuti emopoietici, incluso il midollo osseo ed il sistema linfatico

• Leucemia acuta
• Leucemia cronica

La leucemia acuta (LA) è un tipo di cancro del sangue a sviluppo rapido che necessita un trattamento immediato.

• Leucemia mieloide acuta (LMA)
• Leucemia linfoblastica acuta (LLA)

La leucemia cronica (LC) è un tipo di cancro del sangue che normalmente si sviluppa lentamente.

• Leucemia linfatica cronica (LLC)
• Leucemia mielogena cronica (LMC)

LINFOMA

LINFOMA: cancro che interessa il sistema degli organi linfatici. Il sistema linfatico è una parte importante del sistema immunitario. Quando le cellule del linfoma crescono senza controllo, queste provocano un gonfiore del nodo linfatico e possono diffondersi in parti differenti del corpo.

• Linfoma non-Hodgkin (LNH): ci sono numerosi sottotipi, i piú frequenti sono linfomi diffusi a grandi cellule B (DLB-CL) e linfoma follicolare(LF).
• Linfoma di Hodgkin (LH)

Il linfoma non-Hodgkin è di gran lunga piú comune del linfoma di Hodgkin. Complessivamente il linfoma rappresenta il tipo piú frequente di neoplasie ematologiche.

MIELOMA MULTIPLO

MIELOMA MULTIPLO: tumore che si manifesta in un tipo di globuli bianchi chiamato plasmacellule. Le plasmacellule sono importanti per il sistema immunitario dell'organismo e sono impegnate nella produzione di immunoglobulina. Il mieloma multiplo (MM) causa l'accumulazione delle cellule cancerogene nel midollo osseo, dove prendono il sopravvento sulle cellule sane e causano l'arresto della produzione di anticorpi utili: il midollo osseo è notevolmente colpito dall'espansione di plasmacellule anomale, con varie conseguenze, tra cui un'attività immunitaria inefficiente.

SINDROMI MIELODISPLASTICHE

SINDROMI MIELODISPLASTICHE: gruppo di condizioni dove il midollo osseo, che produce cellule ematiche, non funziona bene. Produzione di cellule ematiche immature anomale che non funzionano con conseguenze piuttosto variabili; questo può avere delle ampie conseguenze cliniche, da forme anemiche lievi fino ad un midollo osseo severamente compromesso e manifestazioni cliniche di una fase preleucemica. La manifestazione della malattia è piuttosto variabile, in base ai diversi sottotipi della malattia.

MESSA IN COLUTRA DI UN CAMPIONE ONCOEMATOLOGICO

1. Campione arriva in provetta
2. Registrazione dei dati
3. Aggiunta terreno di coltura RPMI al campione
4. Centrifugazione e aspirazione eccesso
5. Diluizione con pipetta
6. Conta cellulare (camera di burker/contaglobuli)
7. Aggiunta terreno per volume totale di circa 8ml
8. Fiale in incubatore per 24/48/72H

CAMERA DI BURKER

# #0.05 1 mm Scegliere e mantenere un orientamento per la conta. Conta effettuata su 50 quadranti

HARVESTING

SINCRO A (agisce tutta la notte) - Analogo TIMIDINA SINCRO B (agisce per 5 ore) - Presenza TIMIDINA COLCEMID (1-1.5 ora) Blocco fuso mitotico Centrifugazione e aspirazione eccesso Aggiunta IPOTONICA (soluzione con cloruro di potassio) Centrifugazione e aspirazione eccesso (quanto basta per campione) Aggiunta FISSATIVO 4 parti:

• - 3 parti metanolo
• - 1 parte acido acetico

PREPARAZIONE VETRINO PER ANALISI DEL CARIOTIPO: METODICA MANUALE

• CENTRIFUGAZIONE
• TOGLIERE FISSATIVO
• RISOSPENSIONE
• GOCCE SU VETRINO
• SCALDARE VETRINO SU PIASTRA
• ANALISI VETRINO SU INVERTISCOPIO
• VETRINO IN STUFA A 67° O/N

PREPARAZIONE VETRINO PER ANALISI DEL CARIOTIPO: BANDEGGIO E COLORAZIONE

• Lavaggio con BICARBONATO (3min a 65°)
• Sciacquo con acqua corrente
• Lavaggio con SSC (azione denaturante, 4 min a 65°)
• Sciacquo con acqua corrente
• Preparazione soluzione TAMPONE DI SORENSEN SORENSEN: Tampone costituito da 2 soluzioni: A e B con rapporto 1:1 e 1 di colorante GIEMSA Es: 15 ml di soluzione: 5 ml A, 5ml B, 5 ml GIEMSA
• Colorazione con soluzione TAMPONE DI SORENSEN
• Sciacquo con acqua distillata

CARIOGRAMMA

0 ? 7 :CARIOGRAMMA 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2 13. 14 15 16 17 18 19 20 21 22 x Y

ANOMALIE CROMOSOMICHE

Cromosomi: lunghi filamenti di DNA che contengono i geni (organizzati secondo una specifica sequenza) Vengono trasmessi dai genitori ai figli attraverso i gameti Nella specie umana i cromosomi sono 46: 22 coppie di cromosomi non sessuali (autosomi) 1 coppia di cromosomi sessuali: XX nella donna e XY nell'uomo Le malattie cromosomiche sono la conseguenza di alterazioni nel numero o nella struttura dei cromosomi che, nella maggior parte dei casi, si verificano durante la formazione dei gameti (cellule uovo e spermatozoi), cioè le cellule sessuali necessarie per la riproduzione Le anomalie dei cromosomi sono principalmente di due tipi:

1. Anomalie del numero di cromosomi
2. Anomalie della struttura dei cromosomi o aberrazioni (rottura o riarrangiamento)

ANOMALIE DEL NUMERO DI CROMOSOMI

Le anomalie del numero di cromosomi sono chiamate aneuploidie e consistono nella presenza di copie in più o in meno di un cromosoma

Trisomia del cromosoma 21

20 21 22

Monosomia del cromosoma 8

6 7 8

ANOMALIE DELLA STRUTTURA DEI CROMOSOMI O ABERRAZIONI

Consistono nel cambiamento della struttura dei cromosomi durante la divisione cellulare e possono provocare l'aggiunta o la perdita di materiale cromosomico che viene rotto e riarrangiato. Possono essere classificate in due gruppi:

• Bilanciate: senza perdita o acquisizione apparente di materiale genetico
• Sbilanciate: con perdita o acquisizione di materiale genetico

DELEZIONE

Breaks in Chromosome Deleted Genetic Material

DUPLICAZIONE

Chromosome- Duplicated Genetic Material

TRASLOCAZIONE BILANCIATA

Chromosome B Chromosome A

TRASLOCAZIONE SBILANCIATA

Credit: U.S. National Library of Medicine

FUSIONE AD ANELLO

Deleted Genetic Material Breaks in Chromosome Fusion Deleted Genetic Material

ISOCROMOSOMA

wo p arms p arm twa q arms q arm

INVERSIONE PARACENTRICA

Centromere Breaks in Chromosome Reinserted Piece of DNA & inversion

INVERSIONE PERICENTRICA

Breaks in Chromosome Centromere Reinserted Piece of DNA with Centromere inversion Credit: U.S. National Library of Medicine

MULTICOLOR FISH

.1. . 2 .4. . 5. .8 .. .9mm · 10 11 mm · 12 . 13## 14. . 15 · 16 @ 17 ... · 18 ... · 19 . . 20 ... .21 ... 22