Preparación de medios para el cultivo de microorganismos y técnicas de inoculación

Índice de Contenidos

3.1
INTRODUCCIÓN AL
CULTIVO DE M.O

3.4
SIEMBRA DE M.O

3.2
MEDIOS DE CULTIVO

3.5
CONDICIONES DE
INCUBACIÓN

3.3
ESTERILIZACIÓN Y
ALMACENAMIENTO DE
MEDIOS DE CULTIVO

3.6
AISLAMIENTO Y
RECUENTO DE M.O

Introducción al Cultivo de Microorganismos

Crecimiento de Microorganismos

O
Utilidad del cultivo:

• Determinar la presencia de microorganismos y realizar su recuento.
• Identificar microorganismos.
• Determinar la sensibilidad a antimicrobianos.

0-1000ml
APPRCIE
900
0 -
800
700
100
-
-
600
500
200
50
400
25
125
M
100
50
100
150
75
75
Izquierda: placa Petri. Derecha: matraces.
-150 ml

Medios de Cultivo

Mezcla equilibrada de nutrientes y otros componentes que permiten
el crecimiento de microorganismos in vitro.

CH0115
Scharlau
---
---
-
Medios de cultivo deshidratados para su preparación

Diseño de Medios de Cultivo

Todos los medios de cultivo están compuestos por:
Base mineral
· Macronutrientes
· Micronutrientes
· Fósforo
· Requerimientos específicos
Suplementación
· Fuente de carbono
· Fuente de nitrógeno
· Fuente de azufre
· Factores de crecimiento

19
K
Potasio
39.102
6
C
Carbono
12.011
7
N
Nitrógeno
14.006
16
S
Azufre
32.064

Constituyentes Habituales

Agente gelificante
Agar
Gelatina
-
Extractos
L
Carbohidratos
Sangre, suero o plasma
-
Peptonas
Amortiguadores o indicadores de pH
Otros constituyentes
Bilis y sales biliares
Agentes reductores
Colorantes
Z
C.H2206
PH
1
=

Tipos de Medios de Cultivo

Consistencia física
· Caldos
· Medios semisólidos
· Medios sólidos

Composición química
· Medios definidos o
sintéticos
· Medios complejos
· Medios enriquecidos

Función
· Medios generales
· Medios diferenciales
· Medios selectivos
· Medios de
enriquecimiento

Tabla 3.1. Medios de cultivo según su consistencia relacionados con el recipiente de uso y
su utilidad

Consistencia
Recipiente
Utilidad
Placa Petri
Aislamiento
Estudio de características
Recuentos, etc.
Sólido
En tubo inclinado (slant o pico de flauta)
(Figura 3.6)
Aumento de la superficie de siembra en aerobiosis
En matraz o frasco
Obtención de gran cantidad de biomasa
Estudio de características específicas
Líquido
En tubo
Obtención de biomasa
Estudio de características específicas
Semisólido
En tubo
Estudio de movilidad
100

Tubo con medio de cultivo inclinado/slant con crecimiento bacteriano en su superficie.
1

Agar McConkey

· AGAR MCCONKEY
MEDIO SELECTIVO PARA ENTEROBACTERIAS
Y
DIFERENCIAL ENTRE
FERMENTADORAS DE LACTOSA Y NO FERMENTADORAS.

Agar Heart Infusion

· AGAR HEART INFUSION
MEDIO DE CULTIVO GENERAL QUE PERMITE EL CULTIVO DE BACTERIAS Y LEVADURAS.
ALPHA
HEART INFUSION

Agar Hektoen Entérico

· AGAR HEKTOEN ENTERICO
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO EMPLEADO PARA EL AISLAMIENTO DE BACTERIAS GRAM - COMO
SALMONELLA Y SHIGELLA SPP, Y DIFERENCIAL PARA FERMENTADORAS Y NO FERMENTADORAS.
Shigella flexneri
Salmonella typhimurium

Agar Levine

· AGAR LEVINE
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO EMPLEADO PARA EL AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS Y
DIFERENCIACIÓN DE ESCHERICHIA COLI.

Agar Bilis Esculina

· AGAR BILIS ESCULINA
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO Y DIFERENCIAL EMPLEADO PARA EL AISLAMIENTO Y DIFERENCACIÓN DE
ENTEROCOCOS.
₹

Agar Manitol Salado (MSA)

· AGAR MANITOL SALADO (MSA),
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO Y DIFERENCIAL EMPLEADO PARA EL AISLAMIENTO DE ESTAFILOCOCOS Y
DIFERENCIACIÓN ENTRE LAS DIFERENTES ESPECIES COAGULASA + DE LAS COAGULASA -.
Usinoculated
epidemia

Agar DNasa

· AGAR DNASA
MEDIO DE CULTIVO DE DIFERENCIACIÓN DE M.O COAGULASA + (S.AUREUS) Y COAGULASA -. REQUIERE DE
LA ADICIÓN DE HCL TRAS HABER SIDO INCUBADO.
3.35 -5

Agar Granada

· AGAR GRANADA
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO PARA EL AISLAMIENTO DE ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO B Y DIFERENCIAL
PARA S. AGALACTIAE.

Agar Columbia

· AGAR COLUMBIA
MEDIO DE CULTIVO DE USO GENERAL PARA EL
CRECIMIENTO DE BACTERIAS EXIGENTES O NO
EXIGENTES. SE PUEDE PREPARAR CON SANGRE
DE CARNERO (5%) PARA SU USO COMO MEDIO
DIFERENCIAL (REACCIONES DE HEMOLISIS), O CON
DIVERSOS ANTIBIÓTICOS PARA SU USO COMO
MEDIO
SELECTIVO
(ESTREPTOCOCOS,
ESTAFILOCOCOS Y ENTEROCOCOS).

Agar Digalsky

· AGAR DIGALSKY
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO PARA EL AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS Y OTROS GRAM - (E.COLI, S,
TYPHIMURIUM, ETC.).

Agar Sabouraud

· AGAR SABORAUD
MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO Y DIFERENCIAL PARA EL CRECIMIENTO DE HONGOS Y LEVADURAS. PUEDE
PREPARARSE JUNTO CON ANTIBIÓTICOS.

Esterilización y Almacenamiento de Medios de Cultivo

Los medios de cultivo deben ser esterilizados (generalmente mediante el uso del
autoclave o filtración).

0
El almacenamiento suele ser en frío (2 ℃-8 ℃), por lo que se pueden utilizar frigoríficos
o cámaras frías.

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Siembra de Microorganismos

Tras la preparación del medio de cultivo, se podrá realizar la siembra de las muestras y
su posterior incubación.

Agotamiento por estría
Las técnicas de siembra más comunes
en placas Petri son:
Por extensión en superficie
1
2
3
En profundidad

Condiciones de Incubación

Temperatura
Agitación
Humedad
Luz
Oxígeno

Heraeus
Estufa de incubación. En ella se aprecia la presencia de una puerta de cristal
que evita la pérdida de humedad y de temperatura.

1
2
3
4
5
Crecimiento de microorganismos según sus requerimientos de oxígeno.
Tubo 1: organismos aerobios. Tubo 2: organismos anaerobios. Tubo 3: organismos anaerobios
facultativos. Tubo 4: organismos microaerofilos. Tubo 5: organismos aerotolerantes.

.....
Frascos de anaerobiosis abiertos y cerrados.

O
.
Cabina o cámara de anaerobiosis.
Fuente: Ángel Ros Die.

Equipos de Incubación

Estufas de incubación
Incubadores con agitación
Cámaras de incubación

Otros Factores de Incubación

3.5 CONDICIONES DE INCUBACIÓN
Presión osmótica
Dióxido de carbono
PH

Aislamiento y Recuentos de Microorganismos

Aislamiento: obtención de colonias de un microorganismo que se encuentren
perfectamente separadas de otras colonias, de forma que todas las bacterias
presentes en dicha colonia provengan de una misma bacteria inicial.

Uno de los métodos de aislamiento más utilizados es la siembra mediante
estría, que requiere diferentes diluciones de la muestra inicial.

Determinación del Número de Microorganismos

Es de gran importancia clínica la determinación
del número de microorganismos presentes por unidad de volumen de muestra.

Se puede realizar el recuento manual o bien utilizando
métodos basados en la medida de la masa celular, la observación directa o
los contadores electrónicos.

Tiete . Depth
Profondeur
0,100mm
Neubauer
Improved CE
bright-line
0,0025mm2
PRECICOLON
(HBG
GERMANY
ouncing Chamber
& how to work with it
.
.
.
0.100 mm Thickness
C
NEUBAUER
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YouTube

Bibliografía

REAL DECRETO 771/2014 POR EL QUE SE ESTABLECE EL TÍTULO DE
TÉCNICO SUPERIOR DE LABORATORIO CLÍNICO Y BIOMÉDICO.
RECOGIDA, TRANSPORTE Y PROCESAMIENTO GENERAL DE LAS
MUESTRAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. SOCIEDAD
ESPAÑOLA DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y MICROBIOLOGÍA
CLÍNICA. 2017.
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. NEREA PORRES Y ELENA RUÍZ, EDITORIAL
PARANINFO. 2018.
MANUAL DE MICROBIOLOGÍA OXOID: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO.
OTRA BIBLIOGRAFÍA DE INTERÉS:
· MICROBIOLOGÍA 7A EDICIÓN. HARLEY ET AL. EDITORIAL MCGRAW-
HILL. 2008.
· EXÁMENES DE LABORATORIO Y TÉCNICAS MICROSCÓPICAS. GALLE
ET AL.
EDITORIAL JIMS, 1975.