Istologia: studio dei tessuti vegetali e animali e loro classificazione

Introduzione all'Istologia

L'istologia è la disciplina scientifica che studia i tessuti vegetali e animali. L'istologia studia la morfologia dei tessuti, e le cellule che li compongono, sia da un punto di vista morfologico che funzionale. Strumento essenziale per l'istologia è il microscopio ottico, che permette l'osservazione diretta dei tessuti che si vogliono studiare. Perché tale osservazione sia possibile, tuttavia, questi devono essere lavorati e trattati in vari modi: devono essere tagliati in fette sottilissime, devono essere colorati in vari modi, e devono infine essere trattati in modo da prevenirne la decomposizione e permetterne la conservazione per analisi successive. Un tessuto che sia stato in questo modo trattato prende il nome di preparato istologico.

Classificazione dei Tessuti

I tessuti sono strutture costituite da cellule simili per morfologia e/o per funzione, deputati a svolgere uno o più determinati compiti all'interno dell'organismo.Classificazione:

Tessuto Epiteliale

TESSUTO EPITELIALE, costituito da cellule strettamente adese, deputato al rivestimento delle cavità interne ed esterne del corpo e alla formazione delle ghiandole

Tessuto Connettivo

TESSUTO CONNETTIVO, costituito da cellule immerse in una sostanza detta matrice cellulare, e deputato a connettere strutturalmente e funzionalmente gli altri tessuti o gli organi. Si differenzia, a seconda delle specifiche morfologiche o funzionali, in vari sotto-tipi tissutali: tessuto cartilagineo tessuto osseo tessuto adiposo il sangue

Tessuto Muscolare

TESSUTO MUSCOLARE, costituito da cellule dette miociti, deputato al movimento volontario o involontario degli organi del corpo

Tessuto Nervoso

TESSUTO NERVOSO, costituito da cellule dette cellule nervose o neuroni, deputato alla ricezione e alla trasmissione degli stimoli sia interni che esterni.

Tipi di Colorazioni Istologiche

TIPI DI COLORAZIONI ISTOLOGICHE Colorazioni che identificano diverse componenti cellulari, ma non in grado di identificare la natura chimica delle sostanze cellulari colorate

Ematossilina-Eosina

Ematossilina-eosina classica · EMATOSSILINA: colorante basico, colora in viola/blu la cromatina nei nuclei, la sostanza fondamentale cartilagine . EOSINA: colorante acido, colora in rosa-rosso, il citoplasma cellulare e le fibre connettivali Ematossilina ed eosina (EE) Questa è la tecnica comunemente usata nell'istologia animale e negli esami istopatologici di routine. Il colorante basico ematossilina colora le strutture acide di blu violaceo. I nuclei e il reticolo endoplasmatico rugoso, per esempio, mostrano un'alta affinità per questo colorante a causa del loro rispettivo contenuto di DNA e RNA. Al contrario, l'eosina è un colorante acido che colora strutture basiche in rosso o rosa. La maggior parte delle pro- teine citoplasmatiche sono basiche e, perciò, il citoplasma si colora generalmente in rosa o in rosso rosato. In generale, quando la EE è applicata a cellule animali, i nuclei si colorano in blu e il citoplasma in rosso o in rosa.(D OEritrociti

Colorazione Giemsa

Giemsa Miscela di coloranti (blu di metilene, eosina e azzurro II) per il sangue Nuclei porpora Citoplasmi blu Globuli rossi rosa Granulociti Neutrofili Eosinofili Basofili Giemsa Questa tecnica è usata normalmente per la colorazione delle cellule del sangue e per altri tipi di strisci cellulari quali, ad esempio, quelli di midollo osseo. I'nuclei si colorano in blu scuro-violetto, il citoplasma in blu pal- lido e gli eritrociti in rosa pallido.

Tipi di Colorazioni IstoChimiche

TIPI DI COLORAZIONI ISTOCHIMICHE Colorazioni istochimiche: colorazioni in grado di identificare la natura chimica delle sostanze cellulari colorate (proteine, zuccheri, lipidi) Lipidi: Sudan nero, blu Nilo ... Carboidrati: reazione PAS, Alcian blu ... Proteine: reazione Masson, Gomori, Weigert, Impregnazione argentica ...

Reazione PAS

PAS Mette in evidenza in rosa polisaccaridi, in blu i nuclei Reazione con l'acido periodico-Schiff (PAS) Le tecniche di colorazione che marcano specificamente componenti delle cellule e dei tessuti sono chiamate tecniche di colorazione istochimica. Tali tecniche sono indispensabili per la comprensione della struttura e della funzione di cellule e tessuti e per formulare una diagnosi su molti tessuti patologici. La reazione PAS colora i carboidrati complessi di un colore rosso intenso, tradizionalmente definito magenta. La mucina pro- dotta dalle cellule caliciformi dell'apparato gastrointestinale e di quello respiratorio si colora in magenta con questa tecnica ed è perciò definita PAS-positiva. Le membrane basali e l'orletto striato dei tubuli renali e del- l'intestino sono PAS-positivi, così come lo sono la cartilagine e, in una certa misura, il collagene. È PAS-posi- tivo anche il glicogeno, una forma di deposito intracellulare di carboidrati che si trova in cellule come gli epatociti e le cellule muscolari.

Alcian-PAS

Alcian-PAS Nuclei, blu Mucosostanze, acide blu chiaro Polisaccaridi e mucopolisaccaridi neutri, porpora vivian I DU villante.

Alcian Blu

Alcian blu L'Alcian blu è una colorazione per le mucine che può essere usata in associazione con altri metodi come l'EE o il van Gieson (vedi oltre). Certi tipi di mucine, ma non tutti, sono colorati in blu da questo metodo, così come la cartilagine. Quando la tecnica è associata con il van Gieson, il colore Alcian blu diventa verde.

Tricromica di Masson

Tricromica di Masson Questa tecnica è molto usata per il tessuto connettivo poiché permette di evidenziare molecole della matrice extracellulare soprattutto il collagene. Come indica il suo nome, questa tecnica si basa su tre colori: i nuclei e altre strutture basofile sono colorate in blu, il collagene è colorato in verde o in blu, in relazione alla variante della tecnica usata, e il citoplasma, il muscolo, gli eritrociti e le cheratine sono colorate in rosso brillante.

Van Gieson

Van Gieson Questo è un altro metodo per il tessuto connettivo in cui il collagene è colorato in rosso, i nuclei sono blu e gli eritrociti e il citoplasma sono gialli. Quando è usata insieme con colorazioni per il tessuto elastico, l'elastina si colora in blu-nero, oltre ai colori descritti precedentemente. Questa tecnica di colorazione è particolarmente utile per i vasi ematici e la pelle.

Colorazione per il Tessuto Reticolare

Colorazione per il tessuto reticolare Questo metodo dimostra le fibre reticolari del tessuto connettivo, che vengono colorate in blu-nero. I nuclei possono essere controcolorati in blu con l'ematossilina o in rosso con il rosso neutro.

Tecnica Azan

Azan Questa tecnica è tradizionalmente classificata come una tecnica per il connettivo, ma è molto valida anche per la dimostrazione di fini dettagli citologici, specialmente nell'epitelio. I nuclei sono colorati in rosso brillante; il colla- gene, la membrana basale e le mucine sono colorati in blu; il muscolo e gli eritrociti sono colorati in rosso-arancio.

Giemsa per Cellule del Sangue

Giemsa Questa tecnica è usata normalmente per la colorazione delle cellule del sangue e per altri tipi di strisci cellulari quali, ad esempio, quelli di midollo osseo. I 'nuclei si colorano in blu scuro-violetto, il citoplasma in blu pal- lido e gli eritrociti in rosa pallido.

Blu di Toluidina

Blu di toluidina È un colorante basico che colora i componenti acidi con varie tonalità di blu. È comunemente usato su fette molto sottili di campioni inclusi in resina. Alcuni componenti dei tessuti sono in grado di cambiare il blu in rosso; questo fenomeno è definito metacromasia.

Metodi con Oro e Argento

Metodi con l'oro e con l'argento Questi metodi erano estremamente popolari alla fine del XIX secolo e sono oggi usati solo occasionalmente per dimostrare fini strutture come i prolungamenti dei neuroni, le placche motrici e le giunzioni intercellulari. In relazione al metodo usato, il prodotto terminale è nero, bruno o dorato.

Colorazione Weigert

Weigert Colora le fibre elastiche del connettivo

Impregnazione Argentica

Impregnazione argentica TESSUTO NERVOSO Neurotubuli e neurofilamenti in nero Nuclei in rosso

Metodi di Nissl e Blu di Metilene

Nissl Per identificare i neuroni - N N A Metodi di Nissl e del blu di metilene Queste tecniche usano un colorante basico per colorare il reticolo endoplasmatico rugoso (e i ribosomi, in generale) dei neuroni; quando questo è visibile sotto forma di aggregati è definito sostanza di Nissl.

Sudan Nero e Osmio

Sudan nero e osmio Questi coloranti si legano a strutture contenenti lipidi, come la mielina, colorandole in bruno-nerastro.

Osmio Tetrossido

Osmio tetrossido Mette in evidenza gli adipociti

Tricromica di Gomori

Tricromica di Gomori Domeneghini et al., Acta Histochemica (2005), 106: 477-487

Tecniche Immunoistochimiche

Tecniche immunoistochimiche Una varietà di tecniche immunistochimiche vengono ora usate di routine sia a scopo diagnostico che per la ricerca. In diversi capitoli di questo libro sono state presentate fotografie di preparati colorati con la tecnica dell'immuno- perossidasi (per es. fig. 1.9e, 11.5 e 17.21a). Descriveremo qui brevemente i concetti alla base di queste tecniche. Le tecniche immunoistochimiche si basono innanzitutto sul riconoscimento specifico fra antigene e anticorpo. a nazione di tessuto. per esempio l'insulina umana net